為了探索4gy-rt誘導抗腫瘤免疫反應的機制，我們檢測了rt誘導的樹突狀細胞(dc)的激活。4gy-rt治療既沒有引起腫瘤細胞死亡(擴展數據圖4)，也沒有增加支氣管淋巴結中cd103+交叉呈遞的dc(擴展數據圖4b)。接下來，我們對接受rt(0gy、4gy或8gy3)聯合igg或pd-1抗體治療的kp1肺進行r-eq分析。比較4gy-rt組、0gy(模擬)組和8gy-rt(無效劑量)組在抗pd-1治療前後的差異表達基因(p&p;p;lt;00&bp;1，倍增≥2和最小二乘平均≥5)。通過將igg隊列中4gy-rt上調的基因與抗pd-1隊列重疊，我們識別了144個特定於該有效輻射劑量上調的基因(圖3和擴展數據圖5)。為了確定這4個gy-rt特徵基因的細胞來源，我們對接受0gy或4gy-rt的kp1荷瘤肺進行了單細胞r-eq(cr-eq)分析。通過將144個簽名基因投影到t分佈隨機鄰居嵌入(t-e)圖，我們發現這些基因在4gy-rt後在氣道上皮/棒狀細胞簇中顯著上調(圖3b)。

    棒狀細胞分泌體與聯合治療的療效有關

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    無論採用哪種耗竭方法，攜帶kp1的肺對4gy-rt的免疫反應均明顯減弱，表現為t細胞向腫瘤胰島的浸潤顯著減弱，效應細胞因子的產生減少(cd4+t細胞中的干擾素-γ/腫瘤壞死因子-α和cd8+t細胞中的gzb)(圖4c和擴展數據圖6d)。值得注意的是，在kp1荷瘤小鼠中，棒狀細胞缺陷取消了聯合治療的療效(圖4d)。

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    電子顯微鏡對棒狀細胞的進一步表徵顯示，與對照組相比，從4gy-rt治療的肺中分離出的棒狀細胞中分泌囊泡的數量增加(擴展數據圖8，b)。我們推測放療後棒狀細胞的分泌可能在提高ici療效中起作用。為了解決這個問題，我們使用cgb11-creert/p23flo/flo轉基因小鼠(簡稱cgb11cre/p23fl/fl)阻止棒狀細胞分泌蛋白進入肺t。突觸體相關蛋白23(p23)是re複合體的關鍵成分，它介導細胞內囊泡融合到膜上，調節胞吐。他莫昔芬治療cgb11cre/p23fl/fl小鼠允許有條件的棒狀細胞特異性缺失p23基因(圖5)，而不改變細支氣管的完整性(擴展數據圖8c)。對支氣管肺泡灌洗液(blf)的分析證實，與野生型對照相比，4gy-rt治療的cgb11cre/p23fl/fl小鼠的棒狀細胞分泌組成分10顯著減少(圖5b)。與棒狀細胞消融一致，p23缺乏抑制了kp1肺對4gy-rt反應中t細胞的浸潤和激活(圖5c和擴展數據圖8d)。

    棒狀細胞減少促腫瘤炎症

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    球狀細胞缺陷(dt治療)小鼠的肺顯示髓系/淋巴細胞比率增加(ye/ly，對照組和dt治療小鼠分別為096和134，圖6)。此外，杆狀細胞缺陷肺中的髓樣細胞表現出炎症介質的表達增加，如il1b、ptg2和tf(圖6b)，據報道它們可以抑制適應性抗腫瘤免疫。我們推測這些棒狀細胞介導的t改變可能影響了t細胞效應器的表型。使用基於圖形的分類，t細胞被分成9個簇(圖6c)，每個簇的功能狀態根據它們的特徵基因來確定(圖6c和補充表2)。我們觀察到效應t細胞簇(c5)顯示細胞因子、效應分子(干擾素-γ和腫瘤壞死因子)和t細胞活化標誌物(pdcd1和)表達增加，增殖t細胞簇(c9)顯示顆粒酶和ki67表達，調節性t細胞簇(c8)顯示fop3和il2r表達(圖6c)。值得注意的是，與對照組(分別為263和196)相比，去杆狀細胞(dt治療)降低了效應器、增殖t細胞和treg細胞的比率((c5+c9)/c8)。總之，這些cr-eq結果表明，rt激活的棒狀細胞的存在有助於適應性抗腫瘤免疫，可能是通過限制kp1腫瘤中髓系細胞介導的炎症。blf樣本的eli檢測顯示，與0gy對照組相比，4gy-rt顯著降低了kp1&bp;t中il-1β、pge_2和tf-α的水平(圖6d)，但在沒有棒狀細胞(dt處理的cgb11cre/idtr)或其分泌體(cgb11cre/p23fl/fl)